HLA-A<'*>0201基因胞外区片段的克隆、表达及多克隆抗体的制备
Gene Cloning, Expression and Preparation of Polyclonal Antibody of the Extracellular Fragment of HLA-A~*0201
目的：在原核中表达及鉴定重组HLA-A*0201基因胞外区片段蛋白分子，并制备其特异性多克隆抗体，为进一步研究HLA-A*0201基因与肺癌及其生物治疗的关系奠定基础。 方法 通过PCR方法自重组质粒pcDNA3.1-HLA-A*0201中获取目的基因，与原核非融合表达载体pBv220连接，重组载体转化大肠杆菌，通过氨苄青霉素筛选获得阳性克隆、小提质粒后，酶切鉴定，并测序确定。阳性克隆诱导表达，SDS-PAGE电泳测其表达，并进行Westernblot分析验证表达产物。通过离子交换柱和分子筛柱两步纯化获取目的蛋白。将获取蛋白免疫小鼠得到抗HLA-A*0201多克隆抗体，ELISA测定抗体效价。 结果：成功克隆HLA-A*0201基因胞外区片段，测序结果与已知序列完全一致。目的基因于原核系统中高效表达，表达产物以包涵体形式存在，并以商品化抗体进行westem blot分析证实为HLA-A*0201蛋白。纯化后得到高纯度的HLA-A*0201基因胞外区片段表达蛋白，免疫小鼠后得到其多克隆抗体，ELISA测定抗体效价为1:10000。 结论：证明克隆获得的HLA-A*0201基因胞外区片段可在原核系统中高效表达，并通过基因工程方法制备抗HLA-A*0201特异性抗体，为HLA-A*0201基因的深入研究提供了基础。
- 作者：
- 吕琳
- 学位授予单位：
- 昆明医学院
- 专业名称：
- 肿瘤学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2006年
- 导师姓名：
- 郝萍；周克敏
- 中图分类号：
- R73-36
- 关键词：
- HLA-A<'*>0201基因胞外区片段；克隆；表达；纯化；多克隆抗体
- the extracellular fragment of HLA-A~*0201 gene；clone；express；purification；polyclonal antibody